总榜公开今日快讯dna测序通用引物选择

一、dna测序只用单引物就可以了

表

4

主要使用的引物及序列

序列技术在现代生物学研究中发挥着越来越重要的作用。在进行

序列分析之前，需要先选择合适的引物，以确保检测到所需的目标序

列，并避免检测到不必要的杂交或引物间的相互杂交。本文将介绍主

要使用的引物及其序列。

基因测序引物

基因测序引物是用于测序

DNA

或

RNA

的引物。这些引物通常包括

一个

DNA

或

RNA

序列和一个与之匹配的引物序列。常用的基因测序引

物包括以下几种：

- M

引物

M

引物是一种通用的测序引物，用于测序单链

DNA

。其序列为：

5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'

- T7

和

SP6

引物

T7

和

SP6

引物用于测序

DNA

文库中的克隆

DNA

。其中

T7

引物的

序列为：

5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'

，

SP6

引物的序列为：

5'-

ATTTAGGTGACACTATAG-3'

- MF

和

MR

引物

MF

和

MR

引物也用于测序单链

DNA

MF

引物的序列为：

5'-

GTAAAACGACGGCCAGT-3'

，

MR

引物的序列为：

5'-CAGGAAACAGCTATGAC-

3'

- T3

和

T7

引物

T3

和

T7

引物与

RNA

兼容，并用于测序

RNA

和

RNA-DNA

杂交分子。

T3

引物的序列为：

5'-AATTAACCCTCACTAAAGGGA-3'

，

T7

引物的序列为：

5'-TAATACGACTCACTATAG-3'

2、 PCR

引物

PCR

引物是用于荧光定量

PCR

、数字

PCR

、标准

PCR

等技术的引物。

以下是几种常用的

PCR

引物：

- GAPDH

引物

二、dna测序通用引物选择原则

测序用引物要求非常严格，不同于PCR用引物。PCR用引物一般只要能和模板结合，3' 端的几个碱基能完全配对，即使引物长达80~100多个碱基，只要调整PCR反应条件，也能成功进行PCR反应。

而测序用引物便不一样了，必须严格符合以下要求。本公司的测序用引物全用引物设计软件Oligo设计。在本公司测序时，我们可免费帮助设计测序用引物。。

●长度在~25个碱基左右，一般选择20个碱基(根据GC含量做适当调整)，3' 端尽量选择G或C碱基 (但不绝对)，以增加与模板的结合能力。

●Tm温度应选择50℃~70℃左右。

●GC含量应选择在50%左右，尽量避开A、T、G、C的连续结构。

●避开引物自身形成发夹结构或引物二聚体结构等复杂结构。

●保证引物和模板100%匹配，特别是3'端的几个碱基一定要100%匹配。同时必须严格保证引物和模板之间只能有一个结合位点。

三、t7测序通用引物为什么只有一个

载体名称

上游引物（

5'primer

）

下游引物（

3'primer

）

P3FLAG-CMV

CMV-30(825-854)

CMV-24(1129-12)

pAc5.1/V5-His(_A,_B,_C)

pAc5-5

BGH rev

pAcG2T

pGEX-5

not available

pACT

T7EEV

T3/EBVrev

pACT2

GAL4 ADfor

pGAL4-ADrv

pACT2

p

p12584

pACYC4(BamHI-site)

PBRforBam

PBRrevBam

pACYCDuet-1(MCSI)

ACYCDuetUP1 Primer

DuetDOWN1

pACYCDuet-1(MCSII)

DuetUp2

T7-Terminator

pAdEasy-1

not available

not available

pAdTrack-CMV

not available

not available

pAS2-1

GAL4 Bdfor/P24990

pGAL4-BDrv/P31430

pB42AD

pB42ADF

PB42ADR

pBABE

pBMN_5'

pBacPAK8

BAC1

BAC2

pBAD

pBAD-F

pBAD-R

pBAD/HisABC

pBAD-5'

pBBR1MCS

T3/Mrev

T7/Mfor

pBD-GAL4

pBD-GAL4-F

PBD-GAL4-R

pBI121

35S

NOS

pBIND

GAL4-Bdfor

T3,EBVrev

pBK-CMV

MF/T7

MR/T3

pBluescriptIIKS(+/-)

T3/Mrev

T7/Mfor

（优先用

MF

）

pBluescriptIISK(+/-)

T3/Mrev

T7/Mfor

pBluescriptKS(+/-)

T3/Mrev

T7/Mfor

pBluescriptSK(+/-)

T3/Mrev

T7/Mfor

pBR322(BamHI-site)

PBRforBam

PBRrevBam

pBR322(EcoRI/HindIII-sites)

pBRforEco

pBRrevHind

pBR325(BamHI-site)

PBRforBam

PBRrevBam

pBR329(BamHI-site)

PBRforBam

PBRrevBam

pBridge(MCSI)

GAL4-Bdfor

3'BD

pBridge(MCSII)

not available

not available

pBS-T II

T3/Mrev

T7/Mfor

pBS

（

AMP

）

T7

T3

pBSR

T3

T7ter

pBudCE4.1(MCSI)

CMV-Profor,T7

c-mycrev,EBVrev

pBudCE4.1(MCSII)

EF-

1α Fwd

BGH

pBudCE4.1/lacZ/CAT

CMV-Profor,T7

c-mycrev,EBVrev

pBV220

pBV220F

PBV220R

pCAL-c

T7/Tac-Profor

T7-Terminator

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